熔解曲线

熔解曲线（Dissociation curve）是一种用于分析脱氧核糖核酸双螺旋结构随温度变化而降解程度的图形表示方法。这种分析可用于区分特定的反应产物和其他可能存在的非特异性产物。

特征

熔解曲线的关键特征是熔解温度（Tm），即DNA双螺旋结构降解至一半时所对应的温度。不同DNA序列的Tm值会因G-C核苷酸碱基对含量的不同而有所差异，通常情况下，G-C碱基对含量越高，Tm值也相应地更高。

原理

熔解曲线的形成原理是在PCR扩增反应后，逐步提高温度并监测每个阶段的荧光信号。当双链脱氧核糖核酸开始变性时，荧光染料会从结合态转变为游离态，从而导致荧光信号减弱。通过对荧光信号的变化与温度的关系绘制图表，可以在扩增产物中识别出特异性产物与其他产物的区别。对于采用染料法的PCR反应，尤其是使用SYBR Green染料的情况，制作熔解曲线是非常必要的，因为它可以帮助确认扩增产物是否为目标产物。

应用

熔解曲线分析在实时PCR（Real-时间 PCR）的结果评估中有重要应用。单一峰值的出现表明扩增产物具有良好的特异性，而多个峰值则提示可能存在非特异性扩增，如引物二聚体等。通常，当使用SYBR Green染料时，需要进行熔解曲线分析以确保扩增产生的荧光是由所需的目标产物所产生的。

参考资料

熔解曲线技术路线简介.网易手机网.2024-10-30

熔解曲线是.百度文库.2024-10-30

一管多重的实现曲线 熔解曲线.知乎专栏.2024-10-30